单细胞转录组学(Single-cell RNA Sequencing, scRNA-seq)是一种在单细胞水平解析基因表达谱的高通量测序技术。它通过分离单个细胞、捕获RNA、构建文库并进行高通量测序,揭示细胞群体中的异质性、功能差异及动态变化。相比传统转录组学,单细胞测序能够捕捉被均质化掩盖的稀有细胞亚群、发育轨迹和调控网络,为生命科学和医学研究提供前所未有的分辨率。
(1)高分辨率与高灵敏度
单细胞级分辨率:解析每个细胞的基因表达特征,发现稀有细胞亚群(如肿瘤干细胞、特定免疫细胞)。
长读长测序:结合PacBio/Nanopore技术,捕获全长转录本,精准识别可变剪切、基因融合、RNA编辑等复杂事件。
高通量平台:兼容Illumina、10x Genomics、BD Rhapsody等主流技术,单次实验可分析数千至百万细胞。
(2)全流程标准化服务
实验流程:单细胞分离:微流控(如10x Genomics)、微孔板(BD Rhapsody)或流式分选。
RNA提取与扩增:UMI标签技术减少技术噪音,保留原始表达信息。
测序与质控:严格的数据质量评估(reads数、比对率、测序深度)。
数据分析:细胞分群与注释:基于UMAP/TSNE可视化,结合差异基因筛选细胞类型。
发育轨迹推断:Monocle、PAGA等工具解析细胞分化路径。
细胞通讯分析:推断配体-受体互作网络(如CellPhoneDB)。
多组学整合:与空间转录组、表观组、蛋白质组联合分析。
(3)深度学习赋能
数据预处理:scVI、scANVI等自编码器去噪、批次校正。
细胞类型识别:ScGNN、scBERT等图神经网络自动建模细胞间关系。
轨迹推断:Cellformer(Transformer架构)提升轨迹预测精度。
基因调控网络:SCENIC+、GRN-GAN解析转录因子调控机制。
(1)肿瘤研究
肿瘤异质性:解析肿瘤细胞亚群、微环境组成(免疫细胞、成纤维细胞)及交互网络。案例:卵巢癌研究中,长读长测序鉴定30%新转录本亚型,揭示IGF2BP2::TESPA1融合基因驱动转移(PMID: 38128537)。
耐药性机制:识别耐药性细胞亚群及关键驱动基因(如TP53突变)。
靶向治疗:通过肿瘤微环境分析筛选免疫检查点抑制剂靶点(如PD-L1高表达TAMs)。
(2)发育生物学
细胞分化轨迹:构建胚胎发育过程中细胞命运决定的动态图谱。案例:小鼠胚胎发育研究中,通过拟时分析揭示hair细胞与non-hair细胞分化路径(Nature 2025)。
器官形成:解析心脏、肝脏等器官发育中的基因调控网络。案例:人类下丘脑snRNA-seq构建HYPOMAP图谱,揭示BMI相关基因富集的神经元亚型(Nature 2025)。
(3)神经科学
神经元亚型分类:区分兴奋性/抑制性神经元、胶质细胞等,并解析其功能差异。案例:阿尔茨海默病研究中,发现淀粉样蛋白代谢相关基因在特定神经元中的异常表达(STTT 2024)。
疾病机制:解析神经退行性疾病(如帕金森病)中的lncRNA调控网络。案例:Nanopore测序揭示自闭症患者神经元中可变剪切事件的异常(Nature 2024)。
(4)免疫学
免疫细胞图谱:绘制T细胞、B细胞、巨噬细胞等亚型及其功能状态。案例:骨髓纤维化研究中,鉴定S100A8/S100A9驱动的促纤维化间充质干细胞亚群(Cell Stem Cell 2020)。
免疫治疗:分析肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)与免疫检查点表达,指导CAR-T疗法优化。案例:嗅觉神经母细胞瘤研究中,发现S100A8+髓系细胞通过IL-1β/NF-κB信号加剧免疫抑制(Nature Cancer 2024)。
(5)疾病分型与精准医疗
疾病亚型划分:基于单细胞表达谱定义疾病分子亚型(如糖尿病、心血管疾病)。
个体化用药:识别药物敏感/耐药细胞亚群,指导靶向治疗策略。案例:骨髓纤维化患者中,Tasquinimod靶向S100A8/S100A9显著改善MPN表型(Cell Stem Cell 2020)。
(6)植物与农业研究
抗逆机制:解析植物在干旱、盐碱胁迫下的代谢重编程及基因表达变化。
作物育种:鉴定关键发育基因,优化作物品质(如提高抗氧化成分含量)。案例:拟南芥根部snRNA-seq揭示表皮细胞分化轨迹(Plant Cell 2025)。