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FSP1 Inhibitor Assay Kit

FSP1 Inhibitor Assay Kit

货号: UA079020
价格: 3190
规格: 96T
介绍: -
其他: -
产品规格
  • 分子别名

    FSP1 抑制剂检测试剂盒
  • 储存条件

    干冰运输。FSP1放-80℃避光储存,其它成分放-20℃及以下避光储存,有效期12个月。

  • 稀释度

背景介绍
  • FSP1(铁死亡抑制蛋白1),亦称AIFM2,是一种定位于质膜的NAD(P)H依赖性氧化还原酶。研究表明,FSP1的表达水平与癌细胞对铁死亡诱导剂(如GPX4抑制剂RSL3)的耐药性正相关,这一特性使FSP1成为抗癌治疗的新靶点,尤其在GPX4失活或耐药的肿瘤中,靶向抑制FSP1可协同诱导铁死亡。目前针对FSP1的抑制剂开发及其与铁死亡诱导剂的联合疗法,已成为肿瘤治疗领域研究热点。
    FSP1 抑制剂检测试剂盒基于荧光法检测FSP1抑制剂活性,通过特异性底物的酶促反应,精确测定抑制效率,具备高灵敏度、操作简便及高通量兼容性等优点,适用于FSP 1抑制剂的筛选。

产品组分
  • FSP1 抑制剂检测试剂盒组成和规格如下:

操作步骤
  • 1.试剂准备
    1) 10×检测缓冲液室温解冻,按10X的比例用去离子水稀释成1×,稀释后建议当天用完,未稀释的检测缓冲液可于4℃保存1个月。
    2) Resazurin室温解冻,直接使用(96孔板) 或用1×检测缓冲液1:1稀释(384孔板),解冻后应尽快使用,室温避光2 h内保持稳定。
    3) NADH为干粉,每瓶试剂用2 mL(96孔板) 或4 mL(384孔板)的1×检测缓冲液溶解,溶解后应尽快使用,室温避光2 h内保持稳定。
    4) FSP1冰上解冻,将100 μL FSP1与1900 μL 1×检测缓冲液混匀(96孔板)或50μL FSP1与1950μL 1×检测缓冲液混匀(384孔板),建议现配现用,稀释后于冰上保存,并在2 h内使用,未稀释的FSP1于-80 ℃保存,且避免反复冻融。
    5) FSP1 抑制剂室温解冻,直接使用(96孔板) 或用1×检测缓冲液4倍稀释(384孔板),解冻后应尽快使用,未使用的FSP 1 抑制剂于-20 ℃保存,且避免反复冻融。

    2.操作步骤
    1)在96孔或384孔黑板中进行反应,建议96孔板反应体积为100 μL,384孔板反应体积为25 μL。
    2)设置背景孔、100%活性孔、阳性对照孔和实验孔:
    ①背景孔:每孔加入75 μL /10 μL(96孔板/384孔板)1×检测缓冲液,再加入5 μL溶解抑制剂用的溶剂。
    ②100%活性孔:每孔加入65 μL /5 μL(96孔板/384孔板)1×检测缓冲液,再加入10 μL /5 μL(96孔板/384孔板)FSP1和5 μL溶解抑制剂所用的溶剂。
    ③阳性对照孔:每孔加入65 μL /5 μL(96孔板/384孔板)1×检测缓冲液,再加入10 μL /5 μL(96孔板/384孔板)FSP1和5 μL试剂盒中提供的FSP 1 抑制剂。
    ④样本孔:每孔加入65 μL /5 μL(96孔板/384孔板)1×检测缓冲液,再加入10 μL /5 μL
    (96孔板/384孔板)FSP 1和5 μL 测试抑制剂。
    3)加好后,轻轻振荡20s,室温(22~25℃),避光,孵育10 min。
    4)每孔加入10 μL /5 μL(96孔板/384孔板)Resazurin,再每孔加入10 μL /5 μL(96孔板/384孔板)NADH,轻轻振荡20s,室温(22~25℃),避光,孵育15 min。
    5)用 540 nm 的激发波长和 590 nm 的发射波长读板。
    3.结果计算

    注解:
    A:100%活性孔信号 — 背景孔信号
    B:样本孔信号— 背景孔信号

注意事项
  • 1)首次使用试剂后应分装并于-20℃及以下避光储存,保证试剂的稳定性。

    2)溶解抑制剂用的有机溶剂对反应信号有一定的影响,建议反应DMSO终浓度 ≤ 5%,DMF终浓度 ≤ 1%,甲醇或乙醇终浓度≤ 1%。

    3)不同批次不建议混用。非经验证,不建议改变反应试剂用量。

    4)本产品仅作科研用途。