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DNA连接酶在体内可以催化双链DNA中单链DNA断裂处生成磷酸二酯键，T4 DNA连接酶属于DNA连接酶的一种。本试剂盒内含有Fast Ligase以及优化后的Fast Ligation Reaction Buffer (2X)可用于快速DNA连接反应的简易系统。在常温（25℃）下反应5-10min内即可高效地完成粘性末端或平末端 DNA 插入片段与质粒载体连接反应，快速连接的连接效率相当于用T4 DNA Ligase进行常规连接1小时。连接后的产物可直接用于后续的转化实验，无需纯化。
Contain | UA070123-30 Rxns | UA070123-150 Rxns |
Fast Ligase | 30 μl | 150 μl |
Fast Ligation Reaction Buffer(2X) | 1ml | 5 × 1 ml |
1. 在Nuclease-Free离心管中配制如下混合液：
Component | Volume |
Fast Ligation Reaction Buffer (2X) | 10 μl |
Vector DNA | X μl |
Insert DNA | Y μl |
Nuclease-Free dH2O | Up to 20 μl |
Fast Ligase | 1 μl |
2. 摩尔浓度的计算：
摩尔浓度 = [(µg/µl) ÷ (碱基对x 650 daltons)] x 2
3. 将混合液轻轻吹打混合均匀并瞬时离心。
4. 将混合液静置于室温(25℃)5-10min。
5. 取1-5μl反应液转入50μl感受态细胞内进行后续实验，或储存于-20℃。
1. 快速连接酶最后加入。
2. 快速连接缓冲液应提前在室温下解冻并上下摇晃混合均匀。
3. 载体与插入DNA的最佳摩尔比为1:3。
4. 对于载体单酶切插入外源片段的情况，需注意对载体进行脱磷处理，以避免质粒自连。
5. 实验操作时应将酶制品放在冰上，实验结束后立即保存在 -20°C。
Component | Volume |
Fast Ligation Reaction Buffer (2X) | 10 μl |
Vector DNA (6 kb) | 1.5 μl (1.2 nM) |
Insert DNA (0.7 kb) | 0.5 μl (3.6 nM) |
Nuclease-Free dH2O | Up to 20 μl |
Fast Ligase | 1 μl |
以下为连接10min后转化效果图：
阴性对照（未加Fast Ligase）
One Test (UA070123)
(C) One Test (N公司)
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