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PNGase F (N-糖苷酶 F)是一种来源于Elizabethkingia miricola酰胺水解酶， PNGase F通过水解天冬酰胺侧链的酰胺键（Asn-X-Ser/Thr，X≠Pro）释放完整的N-聚糖，同时将Asn转化为天冬氨酸（Asp）。与其他糖苷酶（如Endo H）不同，PNGaseF可切割所有类型的N-聚糖（高甘露糖型、杂合型、复杂型），但无法作用于O-连接糖链或核心α-1,3-岩藻糖修饰的植物/昆虫N-聚糖。该酶在糖蛋白研究、生物制药质量控制及蛋白质组学中具有重要应用。为了提高酶切实验的操作便利性，我们开发了Fast PNGase F Kit，简化了实验步骤，将实验时间缩短至20 min以内，大大提升实验效率。
组分 | UA070119 -50 Rxns | UA070119 -100 Rxns |
PNGase F | 50 μl | 100 μl |
5*Reaction Buffer | 200 μl | 400 μl |
1.两步法去糖基化
1).参考下表在冰浴中配制如下反应体系：
Component | Volume | Final Concentration |
Glycoprotein | - | 10 μg/μl |
5 × Reaction Buffer | 2 μl | 1 × |
ddH2O | Up to 10 μl | - |
用移液器轻轻吹打，充分混匀。
2).变性反应：80ºC孵育2 min。
3).去糖基化反应：反应完成后立即置于冰上冷却，冷却完成后加入1 μL PNGase F，50 ºC孵育10 min。
2.一步法去糖基化
1).参考下表在冰浴中配制如下反应体系：
Component | Volume | Final Concentration |
Glycoprotein | - | 10 μg/μl |
5* Reaction Buffer | 2 μl | 1 × |
PNGase F | 1 μl | - |
ddH2O | Up to 10 μl | - |
用移液器轻轻吹打，充分混匀。
2).去糖基化反应：50 ºC孵育10 min。
推荐进行两步法酶切，可保证更高的酶切效率。
本产品仅作科研用途。
为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
Fast PNGase F Kit对RNaseB去糖基化的效果图。在10 μl反应体系中，加入10 μg RNaseB，80 ºC孵育2 min，冷却至室温后加入1U PNGase F，50ºC孵育10 min。以下为SDS-PAGE检测效果图。
M Marker
Lane 1阴性对照（未加PNGase F）；
Lane 2 competitor；
Lane 3 UA070119；
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