储存于室温(22℃)1周,4℃ 2个月,-20℃ 及以下1年。
UA-Glo 均质即用型细胞活力检测试剂盒用于定量检测活细胞中ATP的含量,从而间接测定活细胞的数量。该试剂具有信噪比高、重复性好、稳定性好的特点。即用型的配方减少了先裂解后检测的实验步骤,从而进一步减少了因为频繁加样导致的误差,且其稳定的辉光信号使该产品尤其适合高通量的肿瘤细胞增殖检测和化合物筛选。
产品由荧光素酶,荧光素,及缓冲液混合后灌装于10 ml 或100 ml的棕色瓶中
产品规格 | 可检测96-孔板的孔数 | 可检测384-孔板的孔数 |
1 x 10 ml | 200 | 1,000 |
1 x 100 ml | 2,000 | 10,000 |
10 x 100 ml | 20,000 | 100,000 |
1. 细胞准备
1) 在96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞。建议使用白板。
2) 准备待检化合物。将合适浓度的待检测化合物加到细胞板孔中。培养液中有机溶剂浓度保持在1-2%以下。设立未加化合物的对照组。根据项目需求继续培养合适的时间。
2. 细胞活力检测
1) 取出UA-Glo细胞活力检测试剂,在室温平衡20分钟。轻摇混匀。
2) 取出待测细胞培养板,在室温平衡20分钟。
3) 加50 µl 的检测试剂到 100 µl 96 孔板细胞中, 或10 µl 试剂到20 µl 384 孔板细胞中,轻轻振荡2分钟,放置暗处继续裂解10分钟。
4) 在luminescence 读板仪上读取荧光信号。
1.温度:荧光酶检测除特别注明之外,都是在室温(22-25C)下进行的。温度对酶反应影响较大。
2.试剂量:非经严格验证,不建议随意改变反应试剂用量。
3.读板时间:在加入试剂后,振摇2分钟,放置暗处10分钟之后读板,建议在加入试剂后两小时内完成读板。
4.板间内参:如果需要进行板间数据比较,建议在所有反应板均设立两孔未加化合物的阳性对照作为板间内参,用板间内参读数对每块板读数先进行纠正(normalization),纠正后的数据再进行下游处理分析。
5.反应板:荧光读数高低可能对临近周围孔读数形成明显干扰,主要是荧光信号外溢。需要时可以使用不透明底的白板或黑板进行实验或验证。
6.使用场景:本产品是针对活细胞的检测试剂。如用于细胞外用重组蛋白组建的反应体系,需要提供额外的ATP。
7.试剂混合:不同批次的试剂,已经启用但未使用完而储存试剂及条件差别比较明显的试剂,不建议混合后使用。
8.分装储存:按照说明书分装储存反应试剂,保证试剂的稳定性。
储存稳定性测试: 1x105/ml的A549 细胞接种于96孔白板透明底培养板,100µl/孔;24小时后平衡至室温,加入储存在室温不同时间的UA-Glo细胞活力检测试剂,50µl/孔,混匀;10分钟后读取荧光值。0hr为保存于-20℃的同批次产品作为对照,计算相对荧光值百分比。
灵敏度测试: 两倍系列稀释的HEK293细胞接种于96孔透明底白板,100µl/孔;24小时后平衡至室温,加入平衡至室温的UA-Glo细胞活力检测试剂,50µl/孔,混匀;10分钟后读取荧光值。荧光信号与细胞数之间具有很好的线性关系(r2>0.999),并可检测到100个细胞/孔。
与同类竞品产品线性比较: 用细胞计数板计数Hela细胞、HEK293细胞、A549细胞,并将细胞浓度调整到5X105/ml,两倍系列稀释的细胞分别接种于96孔透明底白板,100µl/孔;加入平衡至室温的UA-Glo细胞活力检测试剂、国产同类竞品试剂、进口同类竞品试剂(P公司),50µl/孔,混匀;10分钟后读取荧光值。结果显示,在这三个细胞中,UA-Glo细胞活力检测试剂(Neubo)的线性均最优。
检测化合物Staurosporine在不同肿瘤细胞中的活性: 1-5x104/ml的A549细胞,HeLa细胞,MCF-7细胞,和HCT116细胞分别接种于384孔白板透明底培养板,20µl/孔;24小时后加入不同浓度的Staurosporine,于37℃继续培养72小时,然后将细胞平衡至室温,加入平衡至室温的UA-Glo细胞活力检测试剂,10µl/孔,混匀;10分钟后读取荧光值。Staurosporine在A549细胞,HeLa细胞,MCF-7细胞,和HCT116细胞的IC50值分别为:2.9nM; 5.4nM; 16.5nM; 和33nM。
*: 在Z’实验中,分别接种一定浓度的每种细胞到一块384孔白板透明底培养板中,20µl/孔。在实验1,2,3中,细胞铺板24小时后,左半板分别加入1µM的Staurosporine(DMSO的终浓度为0.5%),右半板加0.5%的DMSO; 在实验4,5中,细胞铺板24小时后,右半板分别加入1µM的Staurosporine(DMSO的终浓度为0.5%),左半板加0.5%的DMSO; 加入Staurosporine和DMSO 72小时后,将细胞平衡至室温,加入平衡至室温的UA-Glo细胞活力检测试剂,10µl/孔,混匀;10分钟后读取荧光值。