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UA-Glo Max Luminescent Kinase Assay

UA-Glo Max Luminescent Kinase Assay

货号: UA070100
价格: 445
规格: 10ml
介绍: -
其他: -
产品规格
  • 储存条件

    干冰运输。-20℃及以下避光储存,有效期12个月。

  • 稀释度

背景介绍
  • UA-Glo激酶发光检测试剂盒可以定量测定酶学实验中激酶的活性。该试剂盒通过定量检测激酶反应后剩余ATP的数量以确定激酶的活性:剩余ATP的数量和激酶活性呈负相关。 使用该试剂盒时激酶反应中的ATP浓度最高可至10μM,使用UA-Glo激酶Plus发光检测试剂盒时激酶反应中的ATP浓度最高可至100μM, 而使用UA-Glo激酶Max发光检测试剂盒时激酶反应中的ATP浓度最高可至500μM。该试剂盒可以检测多数激酶,激酶底物包括多肽,蛋白,脂或糖等。该试剂盒可用于激酶抑制物的高通量均相筛选,并可以通过调整ATP浓度区分ATP竞争性和非竞争性抑制物。

产品组分
  • 产品组成: 荧光素酶,荧光素,缓冲液混合后灌装于10 ml 或100 ml的棕色瓶中,规格如下:

    规格

    96-孔板反应数

    384-孔板反应数

    10 ml

    200

    1,000

    100 ml

    2,000

    10,000

    10 x 100 ml

    20,000

    100,000


操作步骤
  • 1. 激酶反应
    1)   在96孔或384孔白不透明实验板中进行激酶反应。建议96孔板反应体积为50μL,384孔板反应体积为10μL。可以在激酶反应中加入浓度梯度的测试化合物。
    2)   激酶反应的激酶和底物浓度需要根据不同的激酶进行优化。在实验所需的适当信噪比的情况下,可以采用在信号线性反应范围的激酶浓度进行实验。
    3)   ATP的浓度: UA-Glo 激酶Max发光检测试剂盒最高可至500μM。
    4)   激酶反应可以在通用反应缓冲液中进行(40mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 mg/ml BSA, 20mM MgCl2)或采用文献报道的反应缓冲液和辅助因子。
    5)   激酶反应的温度和时间需根据不同激酶而设定。进行化合物高通量筛选实验时,建议优化激酶反应于室温(22℃-25℃)进行,以利于在激酶活性测定过程中保持实验板的温度均一性。

    2. 激酶活性测定
    1)   取出UA-Glo 激酶Max发光检测试剂,平衡至室温。轻摇混匀。激酶活性发光检测试剂中的荧光素酶反应对温度变化敏感,试剂和实验板需要平衡到室温,测试过程温度保持恒定(±1℃)。
    2)   如果激酶反应是在非室温,例如30℃进行的,实验板需平衡至室温。
    3)   加50 µL的激酶发光检测试剂到 50 µL 96孔实验板中, 或10 µL激酶发光检测试剂到10 µL 384 孔实验板中,振荡混匀,放置暗处10分钟。
    4)   读取荧光信号。由于荧光信号非常稳定,如有需要,可以在加入检测试剂后3小时内读板。

注意事项
  • 1) 非经严格验证,不建议随意改变反应试剂用量。激酶反应和UA-Glo激酶发光检测试剂的体积比应为1:1。

    2) 首次使用UA-Glo 激酶发光检测试剂后应分装并于负20℃储存,保证试剂的稳定性。反复冻融4次信号强度无损失。

    3) 本产品仅作科研用途。