储存于-20℃ 及以下。有效期12个月。
细胞活力检测有多种方法，如检测染料排除的，检测 ATP 产生的，检测酶对底物降价活性的等。荧光素酶检测法应用比较广泛，是基于活细胞产生 ATP 的能力的。由于是细胞检测，有时需要有内参对照，由此产生 multiplex 分析需求，即对同一多种分析方法同时检测，相互不干扰，彼此检测机理不同，如此可以进行相关对比，从而排除实验因素外的数据差异。国外 CellTiter Fluor （CTF）类产品就是基于这样的原理设计的。UA-Glo Fluorescent Cell Viability Assay性能上与国外品牌产品无明显差异。本产品是基于细胞蛋白酶对多肽产物的降价，产生荧光信号。细胞膜完整性受损时，该蛋白酶就失去了对底物的降价活性。CTF与荧光素酶试剂盒检测原理不同，检测方法也不同，其检测灵敏度次于荧光素酶法，但是可以检测到更早期的轻微的细胞损害，两个检测相容性好，可以进行 multiplex 检测。
蛋白酶底物，缓冲液混合后灌装于 10 ml 或 100 ml 的棕色瓶中及 2ml 管中，规格如下：
规格 | CTF 底物 | CTF 缓冲液 | 可检测的 96-孔板孔数 | 可检测的 384-孔板孔数 |
10 ml | 100μl | 10ml | 100 wells | 500 wells |
5X10ml | 5x100μl | 5x10ml | 500 wells | 2,500 wells |
2X50 ml | 2x500μl | 2x50ml | 1,000 wells | 5,000 wells |
1.细胞准备
1)在96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞。
2)准备待检化合物。将合适浓度的待检测化合物加到细胞板孔中。培养液中有机溶剂浓度保持在1%以下。设立未加化合物的对照组。根据实验需求继续培养合适的时间。
2.细胞活力检测
1)取出CTF细胞活力检测试剂，37 ℃水浴完全溶解。涡旋振荡CTF底物使其彻底混匀，瞬时离心收集CTF底物至管底 【注1】。
2)配制CTF反应液：CTF底物为100x，根据用量用CTF缓冲液配成1x反应液，充分混匀。
3)取出待测细胞培养板，每孔加入等体积的CTF反应液，例如100μl培养液加入100μl CTF反应液 【注2】
4)低速振板20 秒混匀，避光37 ℃ 反应至少30min 后进行荧光检测 【注3】。
5)在荧光读板仪上读取荧光信号，激发光Ex/380-400nm，发射光Em/430nm-500nm，建议使用Em/430nm或500nm【注4】。
6)根据需要，继续进行下游的多重分析，例如Caspases 3/7 细胞凋亡检测。
1.初次使用后建议将底物分装-20℃保存，每次新鲜配制反应液。
2.非经严格验证，不建议随意改变反应试剂用量。
3.读板时间：在加入试剂并于37℃温育30分钟后，可以进行读板，其检测灵敏度略低于37℃温育60分钟或更长时间后读板的结果。建议读板时间最长不超过3hr。
4.关于Ex/Em波长选择：激发光Ex可以选择380nm-400nm,最佳发射光Em波长可根据不同读板仪/细胞优化。HeLa和HEK293 在FlexStation 3(Molecular Devices)上读板，CTF底物在Ex/380nm激发光下最大Em为430nm, Em从430nm-500nm均可得到类似的信号比（DMSO处理和星形孢菌素 (Staurosporine) 处理的细胞的荧光比值）, Em/500nm信号比略优于Em/430nm，但Em/430nm的荧光强度是Em/500nm的5倍以上。
细胞毒药物抑制活性检测：5000细胞/孔的Hela细胞接种于96孔白板透明底培养板，加不同浓度的多西紫杉醇进行处理。65小时后取出，进行序贯荧光细胞活力检测-CTG细胞活力检测，所用体积是60μl medium-60μl荧光检测试剂-60μl CTG检测试剂。以未加药物处理的反应孔读数为100%，计算药物处理孔percentreading，作图求得IC50。
A.与B.分别是国外同类品牌产品及UA CTF的荧光检测结果，C.与D.分别是A.与B.CTF检测后进行的CTG检测结果。两种试剂盒，两种检测方法，获得的IC50均很接近，在6～9nM范围内。结果提示：荧光细胞活力检测试剂与CTG检测试剂相容；CTF检测试剂与国外同类品牌产品性能类似。
HEK293细胞计数，分于96孔培养板板，每孔细胞数如表中所示。按产品说明书分别用UA CTF及国外同类品牌产品进行荧光细胞活力检测，图中读数代表两个重复60分钟读数的均数。结果提示两个试剂盒检测灵敏度类似。
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